1. Einleitung

Supplementierung vonNicotinamid-Mononukleotid (NMN)Hochregulierung derNiveauvonNicotinamid-Adenin-Dinukleotid (NAD+)wurde als vielversprechende Anti-Aging-Intervention vorgestellt. Es ist jedoch immer noch nicht der Fall,eine ernsthafte Herausforderung für die genaueNAD+-Zwischenprodukte quantifizieren, NMN besonders. Ziel dieser Studie ist die Einführung einer neuartigen Methode, der doppelisotopenvermittelten LC-MS/MS-Methodik (dimeLC-MS/MS), zur präzisen Quantifizierung vonNMN in biologischen Proben.

2. Faktoren, die den genauen Nachweis von NMN beeinflussen

NMN ist aufgrund seiner Anfälligkeit für enzymatischeDegradation, Umwandlung in der Probenverarbeitung, sein komplexes Verhalten unter verschiedenen Säulen- und Extraktionsbedingungen sowie Matrixeffekt.


Insbesondere hat NMN die Eigenschaften einer hohen Polarität und einer geringen Flüchtigkeit, die sich leicht in Wasser auflösen, aber schwer in organischen Lösungsmitteln auflösen lässt. Diese Eigenschaften schränken die Anwendung vieler herkömmlicher quantitativer Analysemethoden stark ein.

Biologische ProbenwieBlut trägt signifikante Aktivitäten von CD38 und CD73 (Ecto-5'-Nukleotidase), die beide NMN als Substrat verwenden könnten.

Das Verhalten von NMN in der Säule ist sehr komplex, wahrscheinlich aufgrund der zweigliedrigen Natur seiner Ladungen, so dass subtile Unterschiede in den Extraktions- und Säulenbedingungen die zuverlässige und genaue Detektion von NMN erheblich beeinflussen.

3. Bewältigungsstrategien vondimeLC-MS/MSum den Einfluss von Impact-Faktoren zu reduzieren

Um die Beeinflussung durch die oben genannten Faktoren zu vermeiden,RototypieSpalteNMN-2-KARTONangewendet wird. Diese KolumneenthaltensHochreine Silica-Partikel auf C18-Basisdie eher in der Lage sind, hydrophile Verbindungen zu binden als Kohlenstoffpartikel, wodurch die Trennfähigkeit verbessert wird.

PErchlorsäure (PCA)eingesetzt wird, da esNAD+ effizient extrahieren und NMN aus biologischen Proben wie Plasma mit minimaler Verluste.

So passen Sie Matrixeffekte an:afeste Menge (1 μM) von jedem IsotopenverbindungIchs hinzugefügt zubiologischProben vor der PCA-Extraktion.

4. Der Vorteilsvon dimeLC-MS/MS

DIsotopen-NMN-Standards, NMN (M+14) und NMN (M+5) können in der LC-MS/MS-gesteuerten Methodik den Verbleib von NMN während der Probenverarbeitung genau verfolgenwelcheerhöht die Genauigkeit und Zuverlässigkeit der NMN-Messung in biologischen Proben signifikant. Außerdem kann dimeLC-MS/MS die Extraktionseffizienz und die absoluten Konzentrationen von NMN in verschiedenen Arten von biologischen Proben bewerten.

5. Fazit

Heitistneue LC-MS/MS-getriebene Methodik mit Doppelisotopen-NMN-Standards DoseAccuraUnd das ist auch gut so.und zuverlässigLyNMN in biologischen Proben zu messen. Es kann für zukünftige Studien zur NMN-Aufnahme verwendet werden.

6. Referenz

Unno, Junya et al. "Absolute Quantifizierung von Nicotinamid-Mononukleotid in biologischen Proben durch Doppelisotopen-vermittelte Flüssigkeitschromatographie-Tandem-Massenspektrometrie (dimeLC-MS/MS)." npj aging vol. 10,1 2. 2. Jan. 2024, doi:10.1038/s41514-023-00133-1

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