Außergewöhnliche Vorteile von ultrasensitivem ELISA mit Thio-NAD-Zyklus bei der Bestimmung des Dengue-NS1-Proteins

1. Einleitung

Dengue-Fieber ist eine akute Infektionskrankheit, die durch die Dengue-Virusdurch den Stich einer infizierten Aedes-Mücke (Ae. aegypti oder Ae. albopictus), mit den Hauptsymptomen wie hohem Fieber, Schwindel, Kopfschmerzen, Hautausschlag und SchwerSchmerzen (Augen-, Muskel-, Gelenk- oder Knochenschmerzen) usw. Diese Krankheit ist in tropischen und subtropischen Klimazonen weit verbreitet. Schätzungsweise 100 bis 400 Millionen Menschen infizieren sich jedes Jahr, wobei über 80 % in der Regel mild und asymptomatisch verlaufen. Nichtsdestotrotz kann schweres Dengue-Fieber das Sterberisiko erhöhen, wenn es nicht richtig behandelt wird. Daher ist eine frühzeitige Diagnose dieser Krankheit für ihre rechtzeitige Behandlung von Bedeutung.

Bemerkenswert ist, dass das Nichtstrukturprotein 1 (NS1), ein hochkonserviertes Glykoprotein, hauptsächlich während der Infektion von Denguefieber Virus, der intensiv als Hauptpathogenesefaktor der Denguefieber. Daher wird NSI in der Regel als Biomarker für die Früherkennung dieser Krankheit verwendet.

In dieser Studie wurde ein Sandwich-Enzyme-linked Immunosorbent Assay(ELISA)In Kombination mit dem Thio-Nicotinamid-Adenin-Dinukleotid (Thio-NAD/S-NAD) Zyklus-Methode (im Folgenden als ultrasensitiver ELISA bezeichnet) wird zum Nachweis von NSI verwendet, gefolgt von einem Vergleich mit NAAT, um die Nachweisgenauigkeit zu bestätigen.

2. Vor- und Nachteile herkömmlicher Nachweismethoden für Denguefieber 

Gegenwärtig ist dieHier sind vier Hauptnachweismethoden für Denguefieber.


Die Isolierung und Identifizierung des Virus hat eine hohe Spezifität, ist aber zeitaufwändig und dauert mindestens 5 Tage. Der Antigen-Schnelltest ist unter den anderen Methoden die schnellste und kostengünstigste, aber die Sensitivität und Spezifität sind relativ gering. Der serologische Test auf der Grundlage von IgM und IgG ist durch die Anzahl der Tage der Infektion begrenzt, da das Der Test muss verschoben werden, bis der Antikörperspiegel auf ein nachweisbares Niveau ansteigt.

In der Klinik wird NAAT häufig angewendet, um Denguefieberdurch Schmutz seiner hohen Sensitivität und Spezifität. Diese Methode ist jedoch teuer, umständlich und anfällig für Falschpositivität, die vom geschulten Personal durchgeführt werden muss. Um die Nachteile dieser Verfahren zu überwinden, wird ein neues Nachweisverfahren ultrasensitiver ELISA ist in dieser Studie angewandt.

3. Arbeitsablauf eines ultrasensitiven ELISA mit Thio-NAD-Zyklus

Ein Paar Antikörper istwird zum Einfangen des NS1-Proteins im Sandwich-ELISA und der alkalischen Phosphatase verwendet istmarkiert auf dem Sekundärantikörper. Neben den Antikörpern gibt es ein Androsteronderivat, die 3α-Hydroxysteroid-Dehydrogenase, Thio-NAD und NADH sindwird verwendet, um das Thio-NAD-Enzymkreislaufsystem zu konstruieren. Während der Thio-NAD-Zyklusreaktion akkumulierte Thio-NADH ständig in einer dreieckigen Zahl und konnte bei einer Absorption von 405 nm direkt gemessen werden.

4. Der Vergleich von ultrasensitivem ELISA und NAAT beim Nachweis des Dengue-NS1-Proteins

In der NAAT sind 60 Proben Dengue-positiv und 25 Dengue-negativ. Der Wert der NAAT-Cycling-Schwelle (CT) dieser Dengue-positiven Proben lag zwischen 12,42 und 31,41. Im ultrasensitiven ELISA sind 59 Proben entsprechend positiv zu den NAAT-Ergebnissen, während 25 Proben vollständig negativ zu den NAAT-Ergebnissen sind.

Im Vergleich zu NAAT liegen die Sensitivität und Spezifität des ultrasensitiven ELISA bei 98,3 % bzw. 100 % (Tabelle 2). Von 60 NAAT-bestätigten Dengue-positiven Patientenproben ist nur 1 Probe im ultrasensitiven ELISA negativ. Die NAAT-Daten zeigten, dass es sich bei der Probe um eine Typ-4-DENV-Infektion mit einem CT-Wert von 21,59 handelt. Die Ergebnisse des ultrasensitiven ELISA stimmen mit einem Kappa-Wert von 0,972 (95% CI: 0,917 %) nahezu perfekt mit den NAAT-Ergebnissen überein-1.0).

5. Fazit

Die hochempfindliche ELISA-Methode ist einfach durchzuführen und erfordert keine professionellen Auszubildenden, um sie zu bedienen. Die Detektion kann sofort nach Erhalt einer kleinen Probe gestartet werden. Es eignet sich besonders für die Früherkennung der Dengue-Krankheit in Ländern mit niedrigem Einkommen.

Referenz

Chen, Po-Kai et al. "Fortschrittliche Nachweismethode für Dengue NS1-Protein unter Verwendung von ultrasensitivem ELISA mit Thio-NAD-Cycling." Viren, Bd. 15,9, 1894. 8. Sep. 2023, doi:10.3390/v15091894

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