Eine wissenschaftliche Methode zur Quantifizierung von NMN in biologischen Proben
1. Einleitung
Ergänzung vonNikotinamidmononukleotid (NMN)um die Regelung hochzuregulierenLevel vonNikotinamid-Adenin-Dinukleotid (NAD+)wurde als vielversprechende Anti-Aging-Intervention vorgestellt. Dennoch ist es das eine ernsthafte Herausforderung, um genau zu seinQuantifizieren Sie NAD+-Zwischenprodukte, NMN Vor allem. Diese Studie dient dazu, eine neuartige Methode einzuführen, die doppelte-isotop-vermittelte LC-MS/MS-Methodik (dimeLC-MS/MS), zur präzisen Quantifizierung vonNMN In biologischen Proben.2. Faktoren, die die genaue Erkennung von NMN beeinflussen
NMN ist aufgrund seiner Anfälligkeit für enzymatische Störungen schwer genau nachzuweisenAbbau, Umwandlung in der Probenverarbeitung, ihr komplexes Verhalten unter verschiedenen Säulen- und Extraktionsbedingungen sowie der Matrixeffekt.
Konkret besitzt NMN die Eigenschaften hoher Polarität und geringer Flüchtigkeit, die sich leicht in Wasser lösen, aber schwer in organischen Lösungsmitteln lösen lässt. Diese Eigenschaften schränken die Anwendung vieler konventioneller quantitativer Analysemethoden stark ein.
BIologische Stichprobenwie zum Beispiel Blut trägt signifikante Aktivitäten von CD38 und CD73 (Ecto-5’-Nukleotidase), die beide NMN als Substrat verwenden könnten.
Das Verhalten von NMN in der Säule ist sehr komplex, wahrscheinlich aufgrund der bipartiten Natur ihrer Ladungen, sodass subtile Unterschiede in Extraktions- und Säulenbedingungen die zuverlässige und genaue Detektion von NMN erheblich beeinflussen.
3. Bewältigungsstrategien vondimeLC-MS/MS um die Auswirkungen von Impact Factors zu verringern
Um die Interferenz der oben genannten Faktoren zu vermeiden, gilt ein pRototypSäuleNMN-2 wird angewendet. Diese Kolumneenthaltens C18-basierte, hochreine Siliziumpartikel die eher in der Lage sind, hydrophile Verbindungen zu binden als Kohlenstoffteilchen, was die Trennung verbessert.PErchlorsäure (PCA) wird eingesetzt, da es möglich ist effizient NAD+ extrahieren und NMN aus biologischen Proben wie Plasma mit minimalem Minimum Verluste.
Zur Anpassung an Matrixeffekte,a feste Menge (1 μM) von jedem Isotopische Verbindungis hinzugefügt zuBiologisch Proben vor der PCA-Extraktion.
4. Der Vorteils von DimeLC-MS/MS
DWir können isotopische NMN-Standards ersetzen, NMN (M + 14) und NMN (M + 5) können in der LC-MS/MS-gesteuerten Methodik das Schicksal von NMN während der Probenverarbeitung präzise nachverfolgen, waserhöht signifikant die Genauigkeit und Zuverlässigkeit der NMN-Messung in biologischen Proben. Außerdem kann dimeLC-MS/MS die Extraktionseffizienz und die absoluten NMN-Konzentrationen in verschiedenen Arten biologischer Proben bewerten.
5. Fazit
Thist neue LC-MS/MS-getriebene Methodik mit doppelten isotopischen NMN-Standards Kann accurately und reliably NMN in biologischen Proben zu messen. Es kann für zukünftige Studien zur NMN-Aufnahme verwendet werden.6. Referenz
Unno, Junya et al. "Absolute Quantifizierung von Nikotinamidmononukleotid in biologischen Proben mittels doppelter isotopenvermittelter Flüssigkeitschromatographie-Tandem-Massenspektrometrie (dimeLC-MS/MS)." NPJ Aging Bd. 10,1 2. 2. Jan. 2024, doi:10.1038/s41514-023-00133-1Warum sich entscheidenBONTAC?
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