Außergewöhnliche Vorzüge ultrasensitiver ELISA mit Thio-NAD-Zyklen bei der Bestimmung des Dengue-NS1-Proteins
1. Einleitung
Dengue-Fieber ist eine akute Infektionskrankheit, die durch dieDengue-Virus durch den Biss einer infizierten Aedes-Art (Ae. aegypti oder Ae. albopictus) Mücke,mit den Hauptsymptomen wie hohes Fieber, Schwindel, Kopfschmerzen, Hautausschlag undSchwerwiegende Schmerzen (Augen-, Muskel-, Gelenk- oder Knochenschmerzen) usw. Diese Krankheit ist in tropischen und subtropischen Klimazonen weit verbreitet. Schätzungsweise 100 bis 400 Millionen Menschen infizieren sich jährlich, wobei über 80 % in der Regel mild und asymptomatisch sind. Dennoch kann schweres Dengue-Fieber das Todesrisiko erhöhen, wenn es nicht richtig behandelt wird. Daher ist eine frühzeitige Diagnose dieser Krankheit für ihre rechtzeitige Behandlung von Bedeutung.Bemerkenswert ist, dass das nichtstrukturelle Protein 1 (NS1), ein hochkonserviertes Glykoprotein, hauptsächlich während der Infektion vonDengueVirus, der intensiv als der Hauptpathogenesefaktor von giltDengue-Fieber. Daher wird NSI im Allgemeinen als Biomarker für die frühzeitige Erkennung dieser Krankheit verwendet.
In dieser Studie wurde ein sandwich-enzymgebundener Immunsorbent-Test durchgeführt (ELISA) in Kombination mit derThionicotinamid-Adenin-Dinukleotid (Thio-NAD/S-NAD)Zyklische Methode (im Folgenden als ultrasensitiver ELISA bezeichnet) wird zur Erkennung von NSI verwendet, gefolgt vom Vergleich mit NAAT, um die Erkennungsgenauigkeit zu bestätigen.
2. Vor- und Nachteile traditioneller Detektionsmethoden fürDengue-Fieber
Derzeit ist tHier sind vier Hauptnachweismethoden aufgeführtfür Dengue-Fieber.
Virale Isolierung und die Identifikation sind hoch spezifisch, sind aber zeitaufwendig und dauern mindestens 5 Tage. Die Schnelles Antigen Test ist die schnellste und kosteneffizienteste unter den anderen Methoden, aber die Empfindlichkeit ist und die Spezifität ist relativ gering. Serologische Tests auf Basis von IgM und IgG sind begrenzt durch Die Anzahl der Tage der Infektion, alsdieDer Test muss bis zum Stand der Antikörper verzögert werden steigt auf ein nachweisbares Niveau an.
In der Klinik wird NAAT häufig zur Bestimmung angewendetDengue-Fieber durch Schmutz seiner hohen Sensibilität und Spezifität. Diese Methode ist jedoch teuer, mühsam und anfällig für falsche Positivität, die von geschultem Personal durchgeführt werden muss.Um die Nachteile dieser Methoden zu überwinden, wird eine neue Detektionsmethode eingeführtUltrasensitive ELISA ist in dieser Studie angewandt.
3. Arbeitsablauf der ultrasensitiven ELISA mit Thio-NAD-Zyklus
Ein Paar Antikörperist verwendet zur Einfangung des NS1-Proteins im Sandwich ELISA sowie der alkalischen Phosphataseist auf dem sekundären Antikörper gekennzeichnet. Neben den Antikörpern gibt es ein Androsteronderivat, 3α-Hydroxysteroid-Dehydrogenase, Thio-NAD und NADHsind wurde verwendet, um das Thio-NAD-Enzymzyklussystem zu konstruieren. Während der Thio-NAD-Zyklusreaktion akkumulierte sich Thio-NADH ständig in dreieckiger Zahl und konnte direkt bei einer Absorption von 405 nm gemessen werden.
4. Der Vergleich von ultrasensitivem ELISA und NAAT bei der Detektion des Dengue-NS1-Proteins
Im NAAT sind 60 Exemplare dengue-positiv und 25 dengue-negativ. Der NAAT-Zyklusschwellenwert (CT) dieser dengue-positiven Proben lag zwischen 12,42 und 31,41.Im ultrasensitiven ELISA sind 59 Proben entsprechend positiv auf die NAAT-Ergebnisse, während 25 Proben vollständig entsprechend negativ auf die NAAT-Ergebnisse reagieren.Im Vergleich zu NAAT liegen die Sensitivität und Spezifität der ultrasensitiven ELISA bei 98,3 % bzw. 100 % (Tabelle 2). Von 60 NAAT-bestätigten dengue-positiven Patientenproben ist nur eine Probe negativ im ultrasensitiven ELISA. Die NAAT-Daten zeigten, dass es sich bei der Probe um eine Typ-4-DENV-Infektion mit einem CT-Wert von 21,59 handelt. Die Ergebnisse des ultrasensitiven ELISA stimmen nahezu perfekt mit den NAAT-Ergebnissen überein, mit einem Kappa-Wert von 0,972 (95 % KI: 0,917-1.0).
5. Fazit
UDie intrasensitive ELISA-Methode ist einfach durchzuführen und erfordert keine professionellen Auszubildenden, um sie zu bedienen. TDie Erkennung kann sofort nach Erhalt einer kleinen Probe begonnen werden. Es eignet sich besonders für die Früherkennung vonDengueKrankheit in Einkommensschwache Länder.Referenz
Chen, Po-Kai et al. "Fortschrittliche Nachweismethode für Dengue NS1-Protein mit ultrasensitivem ELISA und Thio-NAD-Cycling." Viren, Bd. 15,9, 1894. 8. Sep. 2023, doi:10.3390/v15091894Produktvorteile und -merkmale vonBONTAC Thio-NAD/S-NAD
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